货品编号: TAKARA.RR047A
品牌: TAKARA
品名: 逆转录试剂盒
规格: 20 μl反应 × 100 次
储存条件: -20℃
制品内容 (Code No.: RR047A: 20 μl反应×100次量)
■ 试剂盒特长
1. 含有去除基因组DNA的gDNA Eraser,只需2 min即可除去基因组DNA。
2. 只需15 min即可高效合成Real Time PCR反应用模板cDNA,是进行2 Step Real Time RT-PCR反应的理想试剂。
3. 反转录引物使用了Random 6 mers和Oligo dT Primer混合的RT Primer Mix,可以均匀合成样品中的各种cDNA。
4. 本制品提供了TB Green qPCR分析法和探针qPCR分析法各自适合的反应体系,可以根据分析方法选择体系。
TB Green qPCR分析法和探针qPCR分析法区别如下:
(1) 反转录反应中RT Primer Mix的用量。
(2) 反转录反应中总RNA的用量。
5. Real Time RT PCR定量需要建立标准曲线,建立标准曲线的条件就是需要将总RNA和反转录cDNA稀释到较低的浓度。如果用水或TE Buffer稀释时,由于模板浓
度低不稳定,因而会缩小曲线范围,结果精度降低。本制品中附加了标准曲线制作用稀释液EASY Dilution (for Real Time PCR) ,将Total RNA或cDNA稀释至低浓度
时也能够进行准确稀释,容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。
■ 注意事项
1.使用本制品合成的cDNA与TB Green关联制品组合使用时,建议使用:
TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (Code No.RR820Q/A/B)
TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420Q/A/B)
以上制品与本制品组合使用,可以得到可信度高的结果。
本制品与TB Green Fast qPCR Mix (Code No. RR430S/A/B) 组合使用时,有时反应性能不好,不推荐使用。
2. 当同时需要进行数次反应时,应先配制各种试剂的混合液 (Master Mix;其中包括RNase Free dH2O、Buffer、酶等),然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的
试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
3. gDNA Eraser和PrimeScript RT Enzyme Mix I 在使用前要小心地离心收集到反应管底部。由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取时应慢慢吸取。同时,要
使用精确、量程适合的移液枪,并且不要使Tip插入液面过深,否则会因Tip壁粘着造成损失,而使酶量不足。
4. 5×gDNA Eraser Buffer和5×PrimeScript Buffer 2(for Real Time)在使用前需Vortex振荡混匀,轻轻离心后使用。
5. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip),以防止样品间污染。